Ma semaine du stress

Quand, après plus de 9 mois, j’ai réussi à avoir mes proteines clonées, et les bacteries toutes prêtes, j’ai decidé que je n’avais marre de temps perdu et qu’il fallait faire quelque chose. Le fait qu’il ne me restent que 6 mois pour finir la thèse n’a rien à voir, bien sûr. J’ai pris un calendrier, j’ai regardé le protocole de production et je me suis preparé pour faire le plus vite possible, la production de toutes mes proteines avec les différents metaux lourds.

Pour produire une metallothioneine avec un des metaux, on a besoin d’environ 3 jours. Le premier jour est très court. On va uniquement preparer le milieu de croissance des bacteries, l’autoclaver, et mettre une preculture à grandir pendant la nuit. Préparation du milieu: 20 minutes; autoclaver: une heure et démie; inoculer les cellules: 5 minutes. Le deuxième jour, on va produire la proteine. Pour cela, on place une partie de la preculture dans plusieurs erlen-meyers de 2 litres (5 normalement) et on laisse grandir la culture pendant une heure et démie. En ce moment, on mettra l’inducteur de notre proteine, et une démie heure plus tard, le metaux désiré. Les cellules vont continuer à produir massivement pendant 3 heures eet démie plus. En ce moment, il faut arreter la culture et commencer la purification de la proteine. Pour celà, on centrifuge la culture pour n’obtenir les cellules. On les casse par ultrasons et on centrifuge pour separer les gros morceaux de cellule des proteines qui resteront à la partie liquide. En ce moment là, on va incuber pendant une bonne heure le proteines avec unes microbulles qui les attrapent et celà nous permetra de séparer la proteine désiré des autres. Une fois celà fait, il nous reste que nettoyer ces petites boules de tout le reste. Là on va y mettre un enzyme qui séparera notre proteine des boules. Cet enzyme va agir toute une nuit. Ce deuxième jour, entre la production et la séparation, on va être au labo pendant 3 h + 1 h + 30′ + 45′ + 1h + 1h celà fait 7 heures et quart d’établie par le protocole, mais si on tient compte des temps de manip entre un truc et l’autre, celà fait vers les 10 heures minimum. Et le troisième jour, est aussi calme: on separe les boules de la proteine, on concentre le liquide, et on la purifie avec la machine automatisé des FPLC. Ceci est une colonne qui va séparer et purifier la proteine et qui est branché à un ordinateur de façon qu’on y met notre liquide et on revient une heure et démi plus tard pour trouver les tubes avec la proteine purifié et un joli graphique imprimé en couleur.

Je devais préparer un totale de 10 productions de proteines. Comme on peut préparer 2 productions dans la même journée et aussi chevaucher les jours… j’ai vu possible de faire en une semaine toutes ces productions: en commençant le dimanche après midi pour preparer le milieu des deux premieres, lundi produire deux proteines et preparer le milieu pour le lendemain; mardi, purifier les deux premieres, produire les deux suivantes et preparer le milieu pour le lendemain… etc jusqu’a samedi où je purifierai les deux dernières. Et je m’en foutais que le jeudi c’était le premier mai. Je voulais finir tout celà cette semaine.

Et celà a été la semaine le plus stressante et fatigante de l’année.

Ça a commencé le dimanche, tranquillement. Au labo 5 du deuxième étage, je prépare le milieu. Je dois aller chercher l’eau distillée au labo 6, je retourne au 5 et je finis de préparer le milieu. L’autoclave est à coté de l’entrée de la troisième étage. J’attend dans mon laboratoire (le 5 de la 2ème) qu’il finisse, et je met la préculture au shacker du même labo.

Et maintenant, voyez vous un jour pris au milieu de la semaine. Tous ont été pareils. Attention, dans la même journée, je suis en train de produire une proteine, la purifier et préparer du milieu pour le lendemain. C’est compliqué à suivre parce que c’est tout chevauché: la plus part de temps je fais la production, la purification est réalisé automatiquement pour la machine des FPLC et dans les temps qu’il me reste, je prépare le milieu pour le lendemain (et aussi je pars un moment manger ou faire un ptit café).

8.30h. Je suis au labo 5. Je met 2 cultures à grandir à partir de la préculture. Une, de 3 litres, va rester dans ce labo ci. L’autre, de 5 litres, va être placée dans la salle 37ºC du premier étage. Je prépare du milieu pour le lendemain, 3 litres, parce que je n’ai plus d’erlenmeyers. Je monte au troisième étage pour l’autoclaver. Je filtre les boules de la proteine faite le jour d’avant (à nouveau je suis au 5-2eme) et je le concentre une première fois (1ère étage-salle des machines).

9h30. Je remet à concentrer la proteine (1-salle des machines).

10h. Je provoque l’induction de ma proteine dans les cultures: celle du labo 5, 2eme et celle de la salle 37ºC, 1ere. Je descend au -2 étage, salle des eaus, pour allumer le FPLC, placer la colonne de séparation et mettre en route le premier programme.

10h30. J’y met le metal désirée. (labo5-2eme et salle-37-1ere). Je monte au 3eme pour voir si l’autoclave est fini. Je descend le milieu et le laisse au labo5-2eme en attendant le soir. Je regarde si la proteine est suffisantment concentré (il reste moins d’1 mL), au 1-salle des machines. Je descend au -2, salle des eaux pour injecter la premiere proteine au FPLC. Je prépare les boules de GS qui vont accrocher ma proteine (2-labo5 et 2-centris).

13h30. Les cultures sont finies. Je commence la centrifugacion de celle-ci du 5-2eme, la centrifugation je la fais à la salle des centris, 2eme. Quand je suis au point de finir, je vais à la salle 37 du premier étage, chercher l’autre culture. Je la centrifuge (2-salle centris).

14h30. Je casse les cellules avec des ultrasons. Celà est au -2, salle de fermentation. Je regarde si le FPLC a bien fini son travail (-2, salle des eaux). J’imprime le résultat, je sépare les tubes avec la proteine. J’injecte la deuxième proteine. Je range la proteine purifiée dans le frigo au 2-labo5.

15h. Je met à centrifuger pour séparer les proteines des morceaux de cellule (2-salle centris) Je nettoye les erlenmeyers utilisés le matin et je prépare à nouveau du milieu (2-labo5). Je l’autoclave (3ème étage).

15h45. Je met à incuber le surnageant de proteines avec les boules de GS (2-labo5). Je nettoye une bonne partie des trucs utilisés.

16h30. Je regarde si le FPLC a bien fini. (-2, salle des eaux). J’imprime le résultat, je sépare les tubes avec la proteine. J’éteins la machine. Je prend la colonne et je la range à la salle 4ºC (2ème). Je range les tubes avec la deuxième proteine au frigo 2-labo5.

17h. Je commence le lavage des boules (partie qui n’a de rigolotte que le nom) au 2ème étage, labo 5, avec des centrifugations constantes au 1ère-salle des machines.

18h30. Je met à incuber les boules avec la trombine, pour séparer ma proteine. Je fais la préparation au 2-labo 5 et je le place overnight à 20ºC, salle des mouches du 2ème. Je monte au 3ème pour sortir le milieu de l’autoclave et je le range au 2-labo5 pour qu’il refroidisse.

19h. Je prend les porteines purifiés (2-labo5) et je les place en aliquote en parties de 200 uL. Je rotule tout et je range à -80ºC (2-salle des centris).

20h. Je prépare la préculture pour le lendemain (2-labo5). Je nettoye tous les trucs qui restent. J’écris ce que j’ai fais dans le cahier du labo.. bon celà n’est pas vrai. D’habitude j’écris et après je fais en suivant ce que j’ai écrit, cette semaine là j’ai presque pas écrit au cahier. En fait,  j’ai écrit ce que j’ai fait pendant la semaine, le lundi suivant.

21h. Je suis sur la route, retour chez moi (40 minutes). Je mange n’importe quoi qu’il y a au frigo, au même temps que je parle avec mon copain par skype.. et je me met au lit completement epuisé ver 23.30 o minuit carrement.

Dimanche, après cette semaine je n’ai rien foutu du tout. Je suis contente, j’ai fini mes proteines, je pourrai maintenant commencer à faire mes annalyses et peut être finir ma thèse un jour! Mais je vous jure que jamais, JAMAIS, je referai une semaine comme celle-là.